革蘭氏染色基本步驟是：（1）涂片固定。（2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。（3）蒸餾水沖洗。（4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。（5）水洗，用吸水紙吸去水分。（6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。（7）蕃紅染色液（?。┤?分鐘后，蒸餾水沖洗。干燥，鏡檢。

　　染色原理：

　　革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法之所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是因?yàn)橐话阏J(rèn)為革蘭氏染色是基于細(xì)菌細(xì)胞壁特殊化學(xué)組分進(jìn)行染色的。

　　通過初染和媒染后，細(xì)胞內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫一碘大分子復(fù)合物。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌由于細(xì)胞壁較厚、肽聚糖含量較高和其分子交聯(lián)度較緊密，故在用乙醇洗脫時(shí)，肽聚糖網(wǎng)孔會(huì)因脫水而明顯收縮，加上它基本不含類脂，故乙醇處理不能在壁上溶出縫隙，因此，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物仍牢牢阻留在細(xì)胞壁內(nèi)，使其呈現(xiàn)紫色。而革蘭氏陰性細(xì)菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交聯(lián)松散，故遇乙醇后，肽聚糖網(wǎng)孔不易收縮，加上它類脂含量高，所以當(dāng)乙醇把類脂溶解后，在細(xì)胞壁上就會(huì)出現(xiàn)較大縫隙，復(fù)合物容易溶出細(xì)胞壁，因此通過乙醇脫色后，細(xì)胞又成無(wú)色。這時(shí)再用紅色染料進(jìn)行復(fù)染，革蘭氏陰性細(xì)菌將獲得一層新的顏色--紅色，而革蘭氏陽(yáng)性菌則仍呈紫色。

　　拓展：

　　革蘭氏染色法的意義就在于鑒別細(xì)菌，把眾多的細(xì)菌分為兩大類，革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。

　　在治療上，大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌都對(duì)青霉素敏感（結(jié)核桿菌對(duì)青霉素不敏感）：大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，它們能產(chǎn)生外毒素使人致病，可以選擇青霉素族，頭孢曲松鈉等。

　　革蘭氏陰性菌，大多數(shù)腸道菌多屬于革蘭氏陰性菌，它們產(chǎn)生內(nèi)毒素，靠?jī)?nèi)毒素使人致病。而革蘭氏陰性菌則對(duì)青霉素不敏感，可以選擇氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星，左氧氟沙星等，也可以選擇大環(huán)內(nèi)酯類比如克拉霉素、羅紅霉素等。所以首先區(qū)分病原菌是革蘭氏陽(yáng)性菌還是陰性菌，在選擇抗生素方面意義重大。